人胃癌細(xì)胞MKN-45復(fù)蘇方法

人胃癌細(xì)胞MKN-45復(fù)蘇方法
慧穎生物熱賣細(xì)胞：

人源 人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞786-O 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報(bào)告 37 常溫

人源 人肝細(xì)胞HL-7702[L-02] 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報(bào)告 37 常溫

人源 人胃癌細(xì)胞MKN-45 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁和少量懸浮生長 提供STR鑒定報(bào)告 37 常溫

人源 人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Jurkat 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；15%胎牛血清；1%雙抗 懸浮生長 提供STR鑒定報(bào)告 37 常溫

人源 人前列腺癌細(xì)胞DU 145 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 MEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報(bào)告 37 常溫

人源 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SK-N-SH 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 MEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報(bào)告 37 常溫

人胃癌細(xì)胞MKN-45復(fù)蘇方法

1、提前打開水裕鍋，加熱到37度，從液氮 罐中取出需要復(fù)蘇的細(xì)胞；

2、放水裕鍋快速解凍(中途不要隨意拿出凍 存管直到凍存管中的液體全部融化)準(zhǔn)備細(xì) 胞專用培養(yǎng)基和無菌離心管培養(yǎng)基需提前預(yù) 熱

3、用完培稀釋凍存管中的細(xì)胞懸液至離心 管中收集細(xì)胞至元南離心管，800-1100 rp/5min，取出離心管，管底可見細(xì)胞沉淀

4、去除上清，用5ml完培重懸離心管中的 細(xì)胞液至T25瓶中，十字搖晃均勻；放入培 養(yǎng)箱，隔天觀察

傳代
1、準(zhǔn)備所需耗材紫外消毒30分鐘，觀察細(xì)胞密度 80%即可傳代； 2、去掉舊培養(yǎng)基，加入3mIPBS緩沖液輕輕潤洗后去 除，加入1ml胰酶，均勻覆蓋細(xì)胞表面(胰酶需提前預(yù) 熱)； 3、細(xì)胞消化至變圓，輕拍瓶身滑落.加入4ml完培終 止消化，收集消化下來的細(xì)胞至無菌離心管， 800-1100 rpm/5min 4、取出離心管，管底可見細(xì)胞沉淀，準(zhǔn)備兩個(gè)T25瓶 ,各加入2.5ml培養(yǎng)基； 5、離心管內(nèi)去上清，用5ml完培重細(xì)胞懸液，分裝至 2個(gè)T25瓶，十字搖晃均勻放入培養(yǎng)箱，隔天觀察；

特殊細(xì)胞收到注意事項(xiàng)

部分細(xì)胞由于貼壁不牢在運(yùn)輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象正確處理后都可以正常生長。 1、將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞（1200rpm3-5min）去除舊培養(yǎng)基； 2、用PBS重懸細(xì)胞，將所有細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次離心（1200rpm3-5min）去除PBS； 3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細(xì)胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養(yǎng)箱消化，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時(shí)間（約1~2分鐘） 4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5ml培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心 （1200rpm3-5min） 去除胰酶； 5、加入5ml左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中； 6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞，若有3-5個(gè)成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長穩(wěn) 定后再消散細(xì)胞。