人神經(jīng)母細胞瘤細胞SK-N-SH傳代方法

人神經(jīng)母細胞瘤細胞SK-N-SH傳代方法
慧穎生物熱賣細胞：

人源 人腎透明細胞腺癌細胞786-O 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人肝細胞HL-7702[L-02] 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人胃癌細胞MKN-45 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁和少量懸浮生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人急性T淋巴細胞白血病細胞Jurkat 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；15%胎牛血清；1%雙抗 懸浮生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人前列腺癌細胞DU 145 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 MEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人神經(jīng)母細胞瘤細胞SK-N-SH 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 MEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人神經(jīng)母細胞瘤細胞SK-N-SH傳代方法

1、提前打開水裕鍋，加熱到37度，從液氮 罐中取出需要復蘇的細胞；

2、放水裕鍋快速解凍(中途不要隨意拿出凍 存管直到凍存管中的液體全部融化)準備細 胞專用培養(yǎng)基和無菌離心管培養(yǎng)基需提前預 熱

3、用完培稀釋凍存管中的細胞懸液至離心 管中收集細胞至元南離心管，800-1100 rp/5min，取出離心管，管底可見細胞沉淀

4、去除上清，用5ml完培重懸離心管中的 細胞液至T25瓶中，十字搖晃均勻；放入培 養(yǎng)箱，隔天觀察

傳代
1、準備所需耗材紫外消毒30分鐘，觀察細胞密度 80%即可傳代； 2、去掉舊培養(yǎng)基，加入3mIPBS緩沖液輕輕潤洗后去 除，加入1ml胰酶，均勻覆蓋細胞表面(胰酶需提前預 熱)； 3、細胞消化至變圓，輕拍瓶身滑落.加入4ml完培終 止消化，收集消化下來的細胞至無菌離心管， 800-1100 rpm/5min 4、取出離心管，管底可見細胞沉淀，準備兩個T25瓶 ,各加入2.5ml培養(yǎng)基； 5、離心管內(nèi)去上清，用5ml完培重細胞懸液，分裝至 2個T25瓶，十字搖晃均勻放入培養(yǎng)箱，隔天觀察；

特殊細胞收到注意事項

部分細胞由于貼壁不牢在運輸過程中發(fā)生細胞脫落，這是正常現(xiàn)象正確處理后都可以正常生長。 1、將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細胞（1200rpm3-5min）去除舊培養(yǎng)基； 2、用PBS重懸細胞，將所有細胞收集到一個離心管中，再次離心（1200rpm3-5min）去除PBS； 3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養(yǎng)箱消化，根據(jù)細胞特性決定消化時間（約1~2分鐘） 4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，迅速加入3-5ml培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心 （1200rpm3-5min） 去除胰酶； 5、加入5ml左右的細胞相應的培養(yǎng)基混勻，按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中； 6、顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單顆細胞，若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化，使之貼壁后待細胞生長穩(wěn) 定后再消散細胞。