菌種的傳代和培養、檢查和復壯、管理

一、傳代和培養

    工作菌種的傳代次數應嚴格控制，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。

    1代是指將活的培養物接種到新鮮培養基中，任何亞培養的形式均被認為是轉種或傳代一次。必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。

細菌的接種、分離和培養

    常用培養基種類：斜面培養基、半固體培養基、液體培養基、平板培養基。

    接種方法：涂布法、劃線法、穿刺法、直接加入法等

    分離：為了獲得純菌種（株），采用的將細菌分離成單個細胞，使其獨立分裂繁殖形成單個菌落的操作技術。

    分離一般采用平板培養基。

    分離方法主要有分段劃線法、連續劃線法、涂布分離法、傾注分離法等。

    培養 ：接種后的培養基，根據不同微生物生長條件的要求，將培養基放在適宜微生物生長的環境中（溫度、濕度、氧氣等），使其生長繁殖的過程。需氣菌培養法和厭氧培養法。

    培養后微生物的生長判斷

    固體培養基

    液體培養基 

二、菌種的檢查與復壯 

   菌種的衰退

   菌種經過長期人工傳代培養或保藏，由自發突變的作用而引起某些優良特性變弱或消失的現象。

   控制菌種的衰退方法 

⑴控制傳代次數 盡量避免不必要的接種和傳代，降低突變幾率。采用良好的傳代保藏方法。《中國藥典》2010年版規定，傳代次數不得超過5代。

⑵創造適宜的培養條件

⑶用不同類型的細胞進行傳代

⑷采用有效的保藏方法

  定期檢查    

  主要檢查項目：菌落形態、革蘭染色、顯微鏡下菌體形態、生化特性及血清學檢查。 

  菌種的復壯： 使衰退的菌種重新恢復原來的優良特性的 過程驗室主要采用分離純化的方法。

三、菌種的管理

1、使用菌種的單位，應具備從事微生物工作的條件和設備。  菌種應由專人負責管理，管理人員應具有微生物專業知識和技術水平，并應具有較強的責任心。

2、實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；

包括：每支菌種標注名稱、標準號、接種日期、傳代次數、進出、收集、貯藏、保存、確認試驗以及銷毀的記錄、標準菌種的申購記錄、從標準菌株到工作菌株操作記錄，如菌種定期轉種傳代，鑒定（純度、特性）、培養基和培養條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。

3 、菌種應冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發性藥品，放置菌種應有的冰箱，應上鎖管理。

4、由專人按操作規程和有關要求定期進行傳代，并定期對保存的菌種進行檢查，一般每年1～2次，（或定期更換凍干菌種）。發現菌種的異常情況應及時檢查。一旦發現菌種污染和變異現象，應立即報告、研究處理。尤其長期保存時。

5、詳細記錄

   菌種的來源、接收、傳代、分離、復壯、使用和鑒定等均應做好詳細記錄。包括菌保存位置、環境（溫度）、種傳代或使用時間、名稱、菌號、代數、傳代或保存形式、分離、復壯方式、使用內容、鑒定情況等都應進行詳細的記錄。

   菌種不得隨意帶出實驗室，外單位索取、購買應有證明和登記，并包裝嚴密。

   菌種處理應嚴格按操作規程進行，滅菌處理應有詳細記錄。

菌懸液的制備與保存：參照《中國藥典》2010版培養基適用性試驗。

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