人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）ELISA Kit|說(shuō)明書(shū)

 人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）ELISA Kit

產(chǎn)品名稱(chēng)：人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）ELISA Kit

別名：人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）ELISA檢測(cè)試劑盒；人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）ELISA酶免試劑盒；人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）ELISA試劑盒

英文名稱(chēng)：Human Ninjurin-2（NINJ2） ELISA kit

產(chǎn)品類(lèi)型：ELISA Kit

種屬：Human

待測(cè)物名稱(chēng)： ninjurin 2

縮寫(xiě)：NINJ2

適合樣本： serum, plasma, tissue homogenates

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

檢測(cè)范圍：                                             

30pg/ml  -1800pg/ml 

保存溫度：4°C（三個(gè)月內(nèi)使用）；-20°C（三個(gè)月后使用）

有效期：4°C（保存6個(gè)月）；-20°C（保存一年）

注意：本試劑盒僅供科研使用

目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）水平。用純化的人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2），再與HRP標(biāo)記的神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2（NINJ2）濃度。

試劑盒組成：

操作步驟

1.       標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800pg/ml， 1200pg/ml，600pg/ml，300pg/ml， 150pg/ml）。

2.       加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.       溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.       配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5.       洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.       加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.       溫育：操作同3。

8.       洗滌：操作同5。

9.       顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.    終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.    測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)     

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋      倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。                 

  注意事項(xiàng)：

1．  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．  濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．  各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．  請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．  底物請(qǐng)避光保存。

7．  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．  所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．  本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。