專家對(duì)ELISA的評(píng)價(jià)

專家對(duì)ELISA的評(píng)價(jià)

ELISA試劑盒是一種十分常用的定性定量方法，人體和動(dòng)物、體外細(xì)胞培養(yǎng)中超過80％蛋白定量都使用其作為檢測的手段。ELISA試劑盒價(jià)格一般非常昂貴，但各家試劑公司的質(zhì)量卻良莠不齊。ELISA的試劑盒有用于科研的，也有用于臨床診斷的。應(yīng)用于臨床診斷的試劑盒必須有衛(wèi)生部的許可文號(hào)，國家對(duì)應(yīng)用于臨床診斷的試劑盒有嚴(yán)格的規(guī)定和要求，制定相關(guān)的手則來管理試劑盒的質(zhì)量。  仔細(xì)閱讀說明書，對(duì)說明書的內(nèi)容有一個(gè)詳細(xì)的了解。

審查內(nèi)容包括： 

1. 試劑盒的名稱：ELISA試劑盒名稱一般由“(物種)＋(測定指標(biāo))＋酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA)"，物種和測定指標(biāo)不能搞錯(cuò)，否則買錯(cuò)了就是你的事情；另外有的試劑盒說明書試劑盒名稱明顯與寫在試劑盒上的名稱不符，這要引起你的警惕。

2. 用途：應(yīng)用于科研還是臨床診斷，用于臨床診斷的有衛(wèi)生部的批準(zhǔn)文號(hào)。 

3. 測定原理：現(xiàn)在ELISA試劑盒除非是測定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，此種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法，即使用生物素-親和素系統(tǒng)，還有少數(shù)的指標(biāo)可能使用競爭法，這類方法適用于半抗原的測定。具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個(gè)抗體必須用單抗，否則背景很高。當(dāng)然如果兩個(gè)都是單抗(這兩個(gè)單抗針對(duì)不同表位)，那么測定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個(gè)用單抗，一個(gè)用多抗，測定的靈敏度會(huì)較高。某些簡單的化合物用ELISA測定時(shí)，因?yàn)闆]有兩個(gè)或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競爭法測定。如果你發(fā)現(xiàn)有測定簡單化合物用雙抗體夾心法作測定原理時(shí)，這個(gè)試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。  一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應(yīng)"(hook eHect)，也就是我們在免疫沉淀試驗(yàn)中所稱的“帶現(xiàn)象"(zone phenomenon)。所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時(shí)，樣品濃度太高，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)測不出來的現(xiàn)象，此時(shí)要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測定。

4. 試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的方法時(shí)，試劑盒的組成一般包括： 已包被單抗的酶標(biāo)板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，打開后有干燥劑，實(shí)驗(yàn)時(shí)暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。 而應(yīng)用于科研的試劑盒，國家則沒有出臺(tái)相關(guān)的質(zhì)量管理規(guī)定，因此試劑盒質(zhì)量也就無法保障。在這種情況下，許多劣質(zhì)的試劑盒在市面泛濫，不少同行戰(zhàn)友為此浪費(fèi)了大量的時(shí)間和金錢，卻沒有得到一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下面給戰(zhàn)友們介紹一下如何判斷試劑盒的質(zhì)量，選購好的試劑盒。ELISA質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過程，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量：

 一、操作因素對(duì)ELISA結(jié)果的影響  ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。以下敘述各個(gè)步驟中的影響因素。 1.加樣 2.溫育 3.洗滌 4.顯色 5.比色

二、灰區(qū)的設(shè)置  通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性"和“陰性"來報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。

三、標(biāo)本復(fù)查  ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。

 四、結(jié)果判斷和報(bào)告 常用下列幾種方法表示結(jié)果：

1.定性測定 

2.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。 

3.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.結(jié)果報(bào)告

說明：慧穎生物ELISA試劑盒，只可用于科研，不得用于臨床！

慧穎生物ELISA試劑盒種屬齊全：包括人、鼠、豚鼠、豬、牛、羊、雞、鴨、鵝、兔等

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