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    HL-7702【HL-7702】細胞培養常見問題

    發布時間:2016-02-18瀏覽:2954次

    HL-7702【HL-7702】細胞常見問題 1

    液體培養基的保存是冷藏好?還是冷凍好?

    答:要冷藏!!因為液體培養基冷凍后再化凍時,其溶液的pH值會發生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響,對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月~一年。

    HL-7702【HL-7702】細胞常見問題 2

    培養液pH對細胞生長的影響有哪些?

    答:由于大多數細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生不良的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。

    但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

    HL-7702【HL-7702】細胞常見問題3

    細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎?

    答:不見得!因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下,pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。

    培養細胞每次進行傳代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶,以便于將含血清的培養基沖洗干凈,這樣就能大大提高消化液的消化能力。

    細胞中心通常使用的消化液濃度為:

    (1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;

    (2)0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA。

    (3)0.25% 胰蛋白酶

        溶液pH8.0~9.0;使用D-Hank液配制。

    多數細胞傳代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。

    HL-7702【HL-7702】細胞常見問題4

    培養細胞狀態欠佳原因有哪些:

    答:1、  培養基的新鮮程度:一般加入血清后的*培養基,2周內用完。否則血清有效成分失活,影響細胞培養。

             建議:*培養基一次不要配太多,200ml以下。或根據用量決定。

     2、  細胞外源微生物的污染:細胞不宜長期體外培養,因為外源微生物污染的幾率大大提高。易發現和難發現的。影響細胞狀態。

            建議:實驗前凍存一批細胞,隔幾個月重新復蘇。即保證實驗所用細胞代數一致,又將外源污染的后果降到zui低。

    3、  排除其他原因:如更換培養條件(血清、培養基等);使用器皿的潔凈程度;

     

     

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