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    MHCC-97H MHCC-97H細胞 細胞株培養

    發布時間:2016-04-01瀏覽:2187次

    標題名稱:MHCC-97H  MHCC-97H細胞 細胞株培養

    細胞名稱

     MHCC-97H人高轉移肝癌細胞

    種屬

    組織來源

    生長狀態

    貼壁生長

    細胞形態

    上皮樣

    培養條件

    培養基類型:DMEM(Hyclone SH30243.01)培養基

    FBS(德國SERANAS-FBS-SA-015): 10%

    抗生素:雙抗

    培養條件:37℃,CO2: 5%

    傳代方法

    收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態:

    如果沒長滿,將培養瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內更換新鮮培養液,繼續培養。

    如果細胞已經長滿(約80%-90%)則傳代后繼續培養。

    貼壁細胞傳代方法:

    1 棄去培養基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

    2 加1ml 0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),讓胰酶與大部分細胞接觸后放入37℃培養箱內,隨時觀察細胞狀態變化,待細胞大部分變圓后加*培養基終止消化。

    懸浮細胞傳代方法:可以直接傳代也可以離心法傳代。

    1 直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。

    2離心法傳代是將細胞連同培養液一并轉移到離心管內, 1000rpm,5分鐘,去除上清,加新的培養液到離心管內,吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。

     一般沒有特殊說明,細胞一般是一傳二。

    凍存方法

    70% *培養基,20%FBS,10%DMSO,現用現配。

    儲存:液氮中長期保存。

    1 觀察細胞在低倍鏡下觀察,便于整體估計細胞密度。

    2 在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養。

    3 收到細胞后若發現培養瓶破損、細胞污染等,請拍照并在三天內與我們。

    注意:我公司所用德國SERANAS-FBS-SA-015南美血清,細胞長勢很好,凡購買我公司MHCC-97H,我公司贈送20-50ML試用裝一瓶。

    當您收到正確產品時,需要計數細胞以確定其數量和活性。

    這一步驟非常重要,能確定您收到的產品是否合格

    1. 在生物安全柜(超凈工作臺)中,將細胞混勻。細胞在1.5ml和2ml試管中的,請選用1000μl的槍頭混勻;在5ml,15ml或50ml的試管中的,請選用5ml的移液管混勻。

    2. 從試管中取10μl細胞樣品,和10μl胎盤蘭混勻后;加入細胞計數板中,進行細胞計數。

    選取正確的稀釋倍數,對正確計算細胞數量和細胞活性是非常重要的

    試管規格

    細胞量

    細胞取樣

    0.4%臺盤蘭

    PBS(1×)

    稀釋倍數

    1.5ml

    0.5-1×106

    10μl

    10μl

    -

    2

    2ml

    0.5-1×106

    10μl

    10μl

    -

    2

    5ml

    5×106

    10μl

    10μl

    -

    2

    15ml

    10×106

    10μl

    10μl

    -

    2

    15ml

    15-20×106

    10μl

    10μl

    80μl

    10

    50ml

    30-100×106

    10μl

    10μl

    80μl

    10

    N = 細胞計數板上四個大格的細胞量

    D = 稀釋倍數

    細胞數量和活性計算公式:

    細胞數量 = N/4×D×_ml = _ × 104

    細胞活性 = 沒有染上臺盼蘭的細胞/全部的細胞×100%

    如果你計數的細胞明顯少于我們聲稱的細胞數,請按以下步驟操作:

    (1) 檢查細胞懸液中是不是有細胞團。

    如果有的話,請用1000μl的槍頭輕輕吹打混勻后,再次取樣計數。

    (2) *的細胞濃度是在計數板中的每個大格里有50-100個細胞(總數200-400)。

    如果不是,請做適當的濃度稀釋后,再計數一次。

    (3) 請立即與我們。

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