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    IOSE80細(xì)胞|IOSE-80細(xì)胞系操作步驟
    發(fā)布時間:2019/8/21瀏覽:3723次

    IOSE80細(xì)胞|IOSE-80細(xì)胞系操作步驟

    細(xì)胞名稱

    IOSE80 人卵巢正常上皮細(xì)胞株

    貨號

    H055

    種屬

    細(xì)胞來源

    從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

    生長特性

    貼壁 上皮樣

    培養(yǎng)條件

    培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS(推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清,貨號:HN-FBS-50)

    溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

    傳代

    1.75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代,一般23天換一次液;

    2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進(jìn)行傳代,傳代比例為1:31:6;

    3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時間,記錄zui佳消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。

    保存

    凍存條件:80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO

    (備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。)

    保存條件:液氮存儲

    供應(yīng)限制

    經(jīng)供研究之用

    常見問題及解決方案

    1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細(xì)胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。

    2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過 72 小時)

    3.細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度80%,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。

     

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