BRL 3A細胞形態(tài)

原代細胞傳代技術(shù)

一、貼壁細胞的消化法傳代 
1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

二、懸浮細胞的傳代 
1、直接傳代
① 讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成細胞懸液后，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、離心法傳代
① 將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心800-1000rpm，5分鐘。
② 去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細胞懸液。
③ 將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

牙髄細胞的傳代

牙髄細胞中主要是成纖維細胞，貼壁生長。

傳代方法：

棄培養(yǎng)液（盡量吸干）

加基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA

輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使消化液浸過有細胞的瓶壁

重復(fù)4～5次

迅速吸去消化液

鏡下觀察細胞變圓回縮（約1分鐘）

加入*培養(yǎng)液（DMEM+10% FCS）終止反應(yīng)

吹打后，1:2接種，繼續(xù)培養(yǎng)。

大鼠系膜細胞傳代

我用的是DMEM低糖培養(yǎng)液，每次傳代前，將培養(yǎng)液，PBS，0.25％的胰酶（沒加edta）,放37度烤箱預(yù)熱（此做法是減少4度的涼液體對細胞的刺激，以防細胞死亡）。

每次換液時，一定要燒培養(yǎng)瓶口，做好無菌觀念。

先拋棄舊液，用PBS先沖凈殘留的血清，再加PBS用滴管輕輕的吹打細胞，將死細胞吹打掉。

加胰酶時注意：若用加edta的，記住了，在鏡下看到細胞在收縮時，趕快吸出胰酶，加血清中止消化。血清可抑制胰酶的活性，但對edta無效。前后大概不到10秒。若用沒有加edta的，時間要適當(dāng)延長，看到細胞變?yōu)橛辛Ⅲw感時，加血清，輕輕拍打，細胞就會散開。若團塊大，可用滴管吹打。

動作一點要快，不能讓細胞離開培養(yǎng)箱時間太長。

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CaKi-2人腎透明細胞癌細胞

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CHO中國倉鼠卵巢細胞

CHO/dhFr倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷

CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株

CL1人前列腺癌

CCRF-CEM人鼻咽癌細胞

CNE-2人鼻咽癌細胞

COLO 205人結(jié)腸癌細胞

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COLO-704人卵巢癌細胞

COLO720E人卵巢癌細胞

COS-1非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞

COS-7非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞

COV362人卵巢癌細胞

COV434人卵巢癌細胞

COV504人卵巢癌細胞

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CRL-9444人膜間皮細胞

CT-26小鼠結(jié)腸腺癌細胞

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CTLL-2細胞毒性T淋巴細胞

CV-1 非洲綠猴腎細胞

CW-2人結(jié)腸腺癌細胞

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D6人肺腺癌

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ECV304人臍靜脈內(nèi)皮細胞

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ES-2人卵巢透明細胞癌

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HCCLMS人肝轉(zhuǎn)移癌

Hce-8693人盲腸腺癌細胞（未分化）

HCE-8962人盲腸未分化癌

HCT 116人結(jié)腸癌細胞

HCT-15人結(jié)直腸腺癌細胞

HCT-8人回盲腸腺癌細胞

HEB人腦膠質(zhì)細胞株

HEC-1-A人子宮內(nèi)膜腺癌細胞

HEC-1-B人子宮內(nèi)膜腺癌細胞

HEEC人食道上皮細胞

HEK293-L人胚腎細胞

HEK293-T人胚腎細胞

HEL人紅白細胞白血病細胞

HELA人宮頸癌細胞

HeLa 229人宮頸癌細胞

hep 3B人肝癌細胞

Hep 3B2.1-7人肝癌細胞

Hep-2喉表皮樣癌

Hep3B人肝癌

Hepa 1-6小鼠肝癌細胞

Hep G2人肝癌細胞

HepG2.2.15人肝癌細胞

HFL1人胚肺成纖維細胞

hFOB 1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞

HGC-27人胃癌細胞（未分化）

HHVEC肝瘤血管內(nèi)皮細胞

HIC人小腸癌細胞

HK-2人腎小管上皮細胞

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HL60急髓白血病細胞

HLamp人肺巨細胞癌細胞

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HNE-1人鼻咽癌細胞

HNE-2人鼻咽癌細胞

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HONE-1人鼻咽癌細胞

HPAC人胰腺癌細胞

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