NK-92細胞

產(chǎn)品名稱：NK-92細胞

中文名稱：人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

生長狀態(tài)：懸浮生長

形態(tài)特性：淋巴母細胞

特征特性：NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。 這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。 NK-92細胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。 NK-92細胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, C

NK-92細胞，用10％胎牛+10%馬血清 +50μg/mlKANA+MEM培養(yǎng)液，37℃ 下置于5％CO₂培養(yǎng)箱中。待細胞融合至80％，用0．25％胰酶消化傳代后接種(細胞密度5 XlO⁴)于培養(yǎng)瓶或孔板，待細胞融合至約70％后用于實驗。

細胞株培養(yǎng)方法如下： 

1.貼壁細胞換液：

1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。

2)用1xD-hank`s洗一次。

3）加入適量的新鮮培養(yǎng)液，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

2.懸浮細胞換液

1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液放入15ml離心管中離心1500rpm 5min。

2)細胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。

3)加入適量的新鮮培養(yǎng)液，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

3.細胞傳代（貼壁細胞傳代采用胰酶消化法，常用消化液為0.25%的胰蛋白液）

1）吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。

2）用1xD-hank`s洗一次。

3）加入0.5ml-1ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液能覆蓋整個瓶底為準）。

4）靜止2-10分鐘（顯微鏡下動態(tài)監(jiān)測）。

5）吸去胰蛋白酶液，加入培養(yǎng)基。

6）用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復吹打瓶壁細胞，形成細胞懸液。

7）吸取1/5-1/10細胞懸液接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

8）加入適量的新鮮培養(yǎng)液，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

4.細胞凍存：

1)預先配制凍存液：90%胎牛血清+10%DMSO

2)取對數(shù)期生長細胞經(jīng)胰酶消化后加入培養(yǎng)液終止胰酶反應，離心（1500rpm 5min）去上清留沉淀加適量凍存液，用吸管吸打制成細胞懸液（1 XlO⁵-5X10⁶/ml)

3)加入1ml細胞懸液于凍存管中，密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期。

5.細胞復蘇：

1）從液氮中取出凍存管，迅速投入37度-38度水浴中

2）使其融化5min內(nèi)用培養(yǎng)液稀釋至原液體的10倍以上，低速離心1500rpm 5min

3）去上清，加入培養(yǎng)液，細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)